Анализ крови РПГА: что это, исследование реакции пассивной гемагглютинации

ВАЖНО! Для того, что бы сохранить статью в закладки, нажмите: CTRL + D

Задать вопрос ВРАЧУ, и получить БЕСПЛАТНЫЙ ОТВЕТ, Вы можете заполнив на НАШЕМ САЙТЕ специальную форму, по этой ссылке >>>

Что показывает анализ крови РПГА

Анализ крови РПГА – одно из важнейших исследований, которое помогает определить наличие патогенных возбудителей в организме.

Метод РПГА очень часто используется при подозрении на сифилис, инфицирование кишечного тракта, коклюш и другие опасные патологии. Когда выписывается направление на подобное исследование, пациенты интересуются, как сдают биоматериал и насколько достоверные результаты дает методика. Об этом и пойдет речь далее.

Что такое РПГА и какие имеет особенности

Далеко не каждый человек знает, что это такое и как расшифровывается аббревиатура РПГА. Под этим сокращением подразумевается реакция пассивной гемагглютинации, методика нужна для определения патогенного процесса в организме.

Этот тест выявляет антигены бледной трепонемы (люис) – патогенного микроорганизма, провоцирующего возникновение сифилиса. Если обследуемый здоров и не страдает от каких-либо хронических заболеваний, при попадании в организм бледной трепонемы иммунитет начинает активно вырабатывать антитела.

Наличие в исследуемом биоматериале антител бледной трепонемы – основание для диагностирования сифилиса.

Условно тестирование на сифилис можно разделить на 2 вида:

Классификация анализа на категории зависит от вида антител, обнаруженных в полученном образце крови. Несмотря на то что впервые такой метод диагностики был проведен в 1965 году, тестирование оказалось настолько эффективным и результативным, что сегодня оно до сих пор не теряет актуальности.

Несомненным достоинством диагностики является то, что она позволяет обнаружить инфекцию на любом этапе развития, в том числе в латентной стадии.

Показания к проведению

Врачи советуют сдать анализ РПГА в следующих случаях:

  • у пациента проявляются клинические симптомы сифилиса (появление эрозий, язв, увеличение лимфоузлов) и регионарной лимфаденопатии; в этом случае РПГА на сифилис является незаменимым тестом, поскольку позволяет выявить болезнь на первичной, вторичной и третичной стадии;
  • возникновение признаков очаговой или диффузной алопеции;
  • если человек имел половой контакт с носителем сифилиса;
  • человек хочет стать донором, сдавать кровь и плазму;
  • РПГА входит в ежегодное профилактическое обследование, которое назначается работникам разных госучреждений;
  • при оформлении медицинской книжки;
  • при госпитализации.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

  • ВИЧ-инфекция;
  • разные формы гепатита;
  • недавно перенесенный инфаркт миокарда;
  • возвратный тиф;
  • туберкулез;
  • наличие венерических заболеваний;
  • клещевой боррелиоз;
  • дифтерия;
  • диффузные заболевания соединительной ткани;
  • злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
  • наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
  • формирование новообразований злокачественной природы;
  • инфекционный мононуклеоз.

Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

Почему для диагностики сифилиса назначается именно РПГА

Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

Использование РПГА при других патологиях

Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

Основные преимущества метода

Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

  • проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
  • для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
  • исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
  • тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.

Особенности проведения

Для осуществления тестирование требуется венозная кровь. Чтобы расшифровка была достоверной, пациенту необходимо ответственно подойти к подготовке к анализу и строго соблюдать врачебные советы.

Обычно специалисты рекомендуют придерживаться таких правил:

  • сдавать биологический материал разрешено только на пустой желудок;
  • перед мероприятием (если сдача крови осуществляется днем или вечером) разрешено пить только минеральную воду без газов, употреблять жидкость нужно в небольших объемах;
  • за пару часов до сдачи биоматериала запрещено курить;
  • категорически запрещено употреблять спиртные напитки за двое суток до процедуры;
  • если пациент принимает какие-либо лечебные препараты, об этом непременно нужно предупредить лечащего врача;
  • если человек чувствует себя плохо, забор крови лучше перенести на другой день, поскольку это может негативно сказаться на расшифровке результата.

Важнейшим этапом является подбор подходящей клиники. Кровь лучше сдавать в современном диагностическом центре с хорошей репутацией.

Как долго проводится анализ?

Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Расшифровка результатов

Чтобы выявить наличие патологии, к полученной крови нужно добавить специальную сыворотку. Если в организме человека присутствуют трепонемы, произойдет реакция агглютинации, вследствие чего эритроциты выпадут в осадок.

Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте. Пассивная гемагглютинация показывает не только присутствие антител, но также дает медику возможность определить их количество.

Положительный результат

Если тест показывает положительную реакцию, это свидетельствует о присутствии возбудителя болезни. Чтобы поставить более точный диагноз, пациента нужно направить на дополнительную лабораторную и инструментальную диагностику.

Неотъемлемым этапом обследование является проверка всех членов семьи и людей, с которыми инфицированный человек вступал в половой контакт.

Как показывает медицинская практика, примерно у 5% пациентов в ходе тестирования проявляется ложноположительная реакция, что может произойти при игнорировании подготовительного этапа, а также при:

  • формировании онкологических новообразований;
  • патологии соединительной ткани;
  • наличии гепатита разных форм;
  • ВИЧ-инфекции.

Также слабоположительный результат может проявиться при беременности. Ложная “+” реакция практически всегда сопровождается низким титром. Интересным моментом является то, что если человек хотя бы раз болел сифилисом, реакция РПГА всегда будет положительной.

Исключение составляют только те случаи, когда сифилис был выявлен на ранней стадии и после этого сразу началась интенсивная терапия.

Отрицательный результат

Тестирование дает отрицательный ответ в таких случаях:

  • у пациента в организме отсутствуют патогенные микроорганизмы, являющиеся возбудителем сифилиса;
  • с момента заражения прошло менее 3 недель, и иммунитет еще не начал производить антитела;
  • забор крови из вены производился неправильно.

Даже если тестирование показало “-”, специалисты все же рекомендуют пройти дополнительные анализы для подстраховки, чтобы убедиться, что патогенные микроорганизмы отсутствуют.

Точность результата

Многочисленные клинические исследования подтвердили, что такое эта методика дает гарантированно правильный результат, если анализ проводился при соблюдении всех правил и пациент строго придерживался врачебных рекомендаций перед забором крови.

Если тестирование дало положительный ответ, вероятность того, что человек инфицирован сифилисом, составляет более 95%.

Неправильная реакция может проявиться только в тех случаях, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени либо лаборант не соблюдал инструкцию при исследовании.

Что касается ложноположительного результата, то он может быть, если диагностика проводилась при наличии инфекционных заболеваний или патологических состояний.

Ложный результат отличается от истинного положительного тем, что он очень быстро становится отрицательным, если тестирование провести повторно через 2 недели.

На данный момент анализ РПГА до сих пор остается самым эффективным и достоверным тестом определения сифилиса и прочих опасных патологий. Поэтому при подозрении на наличие многих заболеваний первым делом медики направляют пациента на РПГА.

Источник: http://prososud.ru/krovosnabzhenie/analiz-krovi-rpga.html

Для чего нужно сдавать анализ крови на РПГА

РПГА является одним из самых значимых анализов крови. Он позволяет выявить сифилис на любых стадиях, а также ряд других заболеваний. Этот анализ считается одним из самых точных методов выявления возбудителей сифилиса. В каких случаях пациента могут отправить на обследование и что значат результаты?

Что такое РПГА

РПГА является реакцией пассивной гемагглютинации, а если точнее — анализом для выявления этого процесса. В ходе исследования легко можно обнаружить антигены бледной трепонемы, именно этот микроорганизм провоцирует сифилис. Если человек полностью здоров, бледная трепонема, попав в организм, провоцирует ответную реакцию со стороны иммунной системы — выработку особых антител. По их наличию и определяется, есть заболевание или нет.

Все лабораторные исследования на сифилис делятся на два типа:

Всё зависит от того, какие именно антитела присутствуют в крови. РПГА относят к специфическому типу анализа для выявления возбудителей сифилиса. Впервые такие исследования стали проводить в 1965 году, РПГА оказался настолько точным анализом, что быстро стал наиболее популярным среди остальных методик диагностики сифилиса. Исследование позволяет выявить болезнь на любой стадии, включая латентную.

Однако в некоторых случаях РПГА может дать ложную положительную реакцию. Это может случиться из-за наличия некоторых вирусных заболеваний или при сниженном иммунитете после какой-либо болезни.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Атеросклероз сонных артерий: что это такое, атеросклеротические бляшки, лечение, холестериновая бляшка

Насколько анализ достоверен?

Если человек заразился сифилисом, выявить болезнь можно не ранее чем через 2-4 недели — только на этом сроке начинают вырабатываться антитела к возбудителю. Иногда инкубационный период может длиться более месяца. РПГА, анализ крови, при ранней диагностике имеет точность 86%. Начальная стадия заболевания самая «неуловимая» для этого типа исследования. А вот на следующих стадиях сифилиса и у носителей латентного вируса, точность диагностики повышается до 99-100%.

Это позволяет применять РПГА как дополнительное исследование для подтверждения уже имеющегося диагноза или при положительных результатах других анализов (нетрепонемного типа). РПГА всё чаще используют для скрининга, но при положительных результатах так или иначе проводят ещё одно специфическое исследование.

Кто в зоне риска

Для проведения РПГА требуется направление от врача. Направить пациента на анализ могут в нескольких случаях:

  1. Если имеются видимые признаки болезни. Сюда относятся язвы на коже, увеличенные лимфоузлы, частичное облысение волосяного покрова и пр.
  2. Если у пациента был прямой контакт с больными сифилисом, для профилактики ему также необходимо пройти обследование.
  3. Все доноры, сдающие кровь, обязаны проверяться на сифилис перед процедурой.
  4. Для оформления санитарной книжки или ежегодных профосмотров на предприятиях также потребуется пройти необходимые обследования.
  5. Если скрининг дал положительный результат.
  6. На сифилис проверяют каждого, кого готовят к госпитализации в стационар.
  7. Обследование пациента перед любой операцией также требует прохождения обследования.

Врач может назначить РПГА не только при подозрении на сифилис или для планового осмотра, но и для диагностики следующих заболеваний:

Как проводится анализ

Для проведения РПГА берётся кровь из вены, полученный образец отправляют на исследование. Чтобы результаты были максимально точны и не искажены, важно правильно подготовиться к процедуре. Чтобы не пришлось сдавать кровь заново, необходимо руководствоваться следующими правилами перед визитом к специалисту:

  1. Кровь сдаётся ранним утром до 8-10 часов.
  2. Нельзя завтракать, пить чай или кофе, допустимо только употребление небольшого количества воды. Желательно, чтобы последний приём пищи был за 10-12 часов до анализа.
  3. Хотя бы за полчаса до обследования нельзя курить, но лучше всего сделать перерыв между сигаретами в 4-6 часов.
  4. В день анализа и минимум за сутки до него нельзя пить алкогольные напитки любой крепости.
  5. Если есть необходимость по графику принимать лекарства, об этом обязательно нужно сказать врачу, если нет возможности немного перенести это по времен.
  6. При плохом самочувствии или слабости нужно обязательно предупредить медсестру, которая забирает кровь для анализа, или врача.

Кровь из вены на РПГА

К подготовке важно относиться ответственно, поскольку от результатов анализа зависит многое, в особенности точная постановка диагноза.

Ошибки в диагностике и назначение неверного лечения могут привести к плачевным последствиям.

Когда ждать результатов

Чтобы РПГА анализ дал наконец положительную или отрицательную реакцию на сифилис, должно пройти определённое время. Положительная реакция может проявиться через месяц после заражения, однако на первичной стадии показатели титров одни из самых низких — менее 1:320. На вторичной стадии показатели увеличиваются, а вот при латентном сифилисе анализы будут такими же, как и в самом начале развития заболевания.

Когда точно определена стадия сифилиса, назначается лечение в виде курса препаратов. Но даже после излечения от заболевания, анализы РПГА могут давать положительные результаты на сифилис. Это случается в большинстве случаев, положительный анализ у людей, вылечившихся от сифилиса, может быть в течение всей оставшейся жизни.

Есть случаи, когда положительные реакции на сифилис вызваны совершенно иными причинами. Такие результаты анализа называют ложноположительными, чаще всего такие реакции бывают:

  • у беременных;
  • во время менструации;
  • если недавно была вакцинация;
  • если был инфаркт миокарда незадолго до обследования;
  • при инфекционных заболеваниях (оспа, грипп, ОРВИ, ВИЧ, гепатит (вирусный) и пр.);
  • при онкологии;
  • при ослаблении иммунитета;
  • у больных с патологиями внутренних органов.

Исследование РПГА для диагностики других инфекций

Реакция РПГА позволяет выявить не только сифилис, но и ряд других инфекционных заболеваний. Сдавать кровь понадобится, например, людям с подозрениями на острую кишечную инфекцию (сальмонеллез).

Болезнь провоцируют сальмонеллы, попадающие в организм человека. По мере развития сальмонеллеза постепенно разрушается структура ЖКТ, а также происходит сильная интоксикация. Основными симптомами кишечной инфекцией являются:

  • рвота;
  • диарея;
  • изменение запаха стула, а также появление в нём слизи или кровавых выделений;
  • боль в животе;
  • высокая температура;
  • озноб;
  • плохое самочувствие;
  • обезвоживание и пр.

Ещё одним заболеванием, для выявления которого можно применять РПГА, является корь. Она характеризуется поражениями слизистых глаза, ротовой полости и дыхательных путей. Кроме этого явными признаками болезни является сыпь на всём теле пациента, а также сильная интоксикация. Последняя сопровождается рвотой, нарушениями стула, нарушением водного баланса в организме и пр.

Исследование РПГА также может выявить столбняк, который является острой инфекцией.

Возбудитель этого заболевания легко проникает в организм через царапины, раны, порезы, ожоги и пр. Также можно заразиться столбняком, если в больницах или при косметических процедурах использовались нестерильные инструменты и материалы. Главными симптомами, по которым можно выявить столбняк, являются:

  • тонус мышц;
  • слабость;
  • раздражительность;
  • плохой аппетит;
  • апатия;
  • судороги в мышцах лица;
  • если столбняк следствие травмы, может ощущаться тянущая вокруг повреждённого участка тела;
  • затрудняется глотание воды и пищи.

Исследование РПГА также применяется для выявления коклюша на любой стадии. Это очень важно, поскольку на начальной стадии заболевания нет чётких симптомов, позволяющих его диагностировать. Подозрения на инфекцию чаще всего появляются уже на более поздних стадиях.

При коклюше может быть повышенная температура, однако точно так же она может оставаться в пределах нормы и не превышать стандартные 36,6. Позже у больного появляется кашель, приступы которого постепенно становятся всё чаще и сильнее.

Итак, реакция пассивной гемагглютинации является крайне эффективным методом диагностики сифилиса. Несмотря на то, что чаще всего РПГА используют для выявления антител бледной трепонемы, с помощью этого анализа можно установить наличие и других инфекций — кори, коклюша, сальмонеллеза и пр. Чтобы результаты исследования были максимально чёткими, важно правильно к ним готовиться и соблюдать все необходимые условия.

Как избавиться от варикоза

Всемирная организация здравooхранения официально объявила варикоз oднoй из самых oпаcных маccoвых бoлезней coвременнocти. Согласно данным cтатиcтики за пocледние 20 лет — 57% бoльных варикoзoм yмирают в первые 7 лет пocле забoлевания, из них 29% — в первые 3,5 гoда. Причины cмерти разнятcя — oт трoмбoфлебита дo трoфичеcких язв и вызванных ими ракoвых oпyхoлей.

О том, как спасти свою жизнь, если вам поставили диагноз «варикоз», в интервью рассказала глава научно-исследовательского института флебологии и академик РАМН. Полное интервью смотрите здесь.

Источник: http://perelomu.net/analizy/analiz-krovi-rpga.html

Что означает анализ крови РПГА, и для чего он нужен?

Содержание

Многие пациенты неоднократно задавались вопросом: «Анализ крови РПГА – что это такое?» Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – такое исследование, которое помогает определить наличие в организме возбудителя, способного провоцировать сифилис. Данный анализ предоставляет достоверные результаты и помогает начать своевременную терапию, которая назначается исключительно специалистом. Для получения качественных результатов рекомендуется соблюдать советы врача. Расшифровкой анализа занимается специалист, поэтому не стоит заниматься самостоятельной диагностикой, так как это может привести к негативным последствиям. Рекомендовано обследование во многих ситуациях.

Значение анализа крови РПГА

Это исследование подразумевает особую реакцию, которая выявляет в организме неактивную гемагглютинацию, помогает вычислить наличие антигенов бледной трепонемы, считающейся контагием сифилиса – опасного заболевания, приводящего к неблагоприятным последствиям, сопровождающегося различной симптоматикой.

В организме она способна спровоцировать определенную реакцию иммунитета, то есть выработку специфических антител. Если после сдачи анализа в крови будут отмечаться положительные результаты, то это свидетельствует о прогрессировании данного организма. Означать это может только одно — срочная терапия.

Серологические исследования бывают:

Данное подразделение опирается на разновидности антител, которые можно выявить в крови пациента в результате обследования. В общей сложности, реакция пассивной гемагглютинации – РПГА – специфическое исследование в отношении бледной трепонемы. Установление сифилиса в организме относится к категории специфических диагностик, которые позволяют определить заболевание в любое время его развития.

Иногда РПГА может повлечь за собой ложноположительный результат исследования у пациента. Данная ситуация наблюдается, если у человека развиваются и диагностируются аутоиммунные заболевания и патологии.

Получение ложных результатов теста могут быть спровоцированы из-за вирусных заболеваний, которые увеличивают в человеческом организме неспецифические антитела. Поэтому пациенту могут назначить иные виды исследований для выявления прогрессирующих патологий, а также повторные анализы РПГА.

Необходимость анализа

Так как сифилис – заболевание, которое передается половым путем, анализ РПГА помогает выявить заражение и поспособствует своевременно начатой терапии. Если проигнорировать незащищенный половой акт, то это может привести к серьезным необратимым последствиям и различным половым заболеваниям.

Данное исследование необходимо:

  • Для определения наличия сифилиса в организме, так как это заболевание передается не только половым путем, может протекать на начальных стадиях практически бессимптомно.
  • Для устройства на работу в различные организации, где сотрудник будет работать с людьми – столовые, больницы, военные организации.

  • При постановке на учет в период вынашивания ребенка. В такой ситуации может корректироваться терапия при беременности (т.к. заболевание может привести к различным отклонениям в развитии плода).
  • Перед операционным вмешательством и при госпитализации пациента.
  • Для доноров крови, чтобы исключить распространение вируса.
  • Для людей, которые отбывают срок в местах заключения.
  • Для пациентов, у которых существует вероятность прогрессирования сифилиса.
  • Для пациентов, у которых скрининговое исследование показало положительный результат.
  • После незащищенного полового акта с непроверенным партнером.
  • Проводится детям, которые были рождены от зараженной бледной трепонемой матери. В данной ситуации ребенку назначается специальная терапия, которая поможет улучшить его здоровье и избавиться от проблемы.
  • Для отслеживания положительных результатов в период активной терапии.
  • Для убеждения, что лечение привело к полному излечению пациента.
ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Кровоизлияние в мозг у новорожденных: последствия, симптомы, причины, чем опасно

Иные обследования

Сифилис – болезнь, которая требует своевременной диагностики и лечения, если выявить патологии в первые дни после заражения, то существует большая вероятность полного излечения. Если есть сомнения, по поводу заражения, то необходимо обратиться за дополнительной консультацией к дерматовенерологу, который будет курировать лечение, подбирающееся под каждого пациента в отдельности в зависимости от стадии патологии.

Чтобы поставить точный диагноз специалист осматривает пациента, уделяется отдельное внимание половым органам.

При данной патологии будут отмечаться специфические признаки:

  • высыпание на половых органах;
  • уплотнение кожного покрова;
  • зуд;
  • увеличение лимфатических узлов.

Но стоит помнить, что на некоторых стадиях патологии лабораторные анализы могут показать отрицательный результат, поэтому может потребоваться повторное обследование спустя некоторый период.

Пациенту также рекомендуется сдать кровь на анализы, помимо РПГА:

Результаты анализов РПГА

Результат анализа будет готов уже через несколько дней, и пациент сможет узнать свой диагноз (если таковой имеется). Определить заражение можно лабораторным путем только через месяц прогрессирования бледной трепонемы в организме, то есть после первичного инфицирования.

Очень часто первичный анализ характерен для первичной стадии. Что касается вторичной, то заболевание уже сопровождается повышением показаний. При скрытом сифилисе также отмечаются пониженные отметки.

После пройденной терапии, которая будет отличаться между собой в зависимости от стадии патологии, у пациента сохранится положительный результат анализа. Не стоит этому удивляться, так как данная ситуация отмечается у большинства зараженных больных.

Для получения достоверных результатов, необходимо предварительно подготовиться:

  1. Кровь сдается на голодный желудок в утренние часы.
  2. Перед тестом не стоит пить большое количество жидкости, так как это может повлиять на кровь. Также компоненты напитков могут оказать свое влияние на результат.
  3. Стоит отказаться от табакокурения перед прохождением исследования и употребления алкогольных напитков накануне.

Кровь для исследования берется из вены, которая располагается на локтевом сгибе. Если вены находятся слишком глубоко (невозможно взять кровь на анализы), то забор может осуществляться из вен, которые находятся на кисти или в области предплечья.

Источник: http://boleznikrovi.com/analizy/serologicheskij/analiz-krovi-rpga-chto-eto.html

Какие анализы крови сдают на сифилис: RW, РПГА, ИФА, VDRL, RPR, РИБТ, расшифровка результатов тестов

Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.

Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» — искусственно созданный).

Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.

Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.

Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.

1. Классификация методов лабораторной диагностики

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

  1. 1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
  2. 2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
  3. 3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

1.1. Прямые методы

  1. 1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
  2. 2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
  3. 3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
  4. 4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

1.2. Непрямые методы

Серологические реакции — это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

  1. 1 Нетрепонемные тесты:
    • Реакция Вассермана (РСК);
    • Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
    • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
    • Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
    • Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней — VDRL.
  2. 2 Трепонемные тесты:
    • Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
    • Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
    • Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
    • Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
    • Иммуноблоттинг.

Рисунок 1 — Алгоритм серодиагностики сифилиса

1.3. Гистоморфологические методы

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Рисунок 2 — Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации — CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе — амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Кровоточат десна: народные средства, как лечить, что делать, между зубами

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

  1. 1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
  2. 2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
  3. 3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
  4. 4 Трудоёмкость выполнения РСК.
  1. 1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
  2. 2 Получение быстрого ответа;
  3. 3 Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

  1. 1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
  2. 2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
  3. 3 Злокачественные новообразования.
  4. 4 Вирусные и бактериальные инфекции.
  5. 5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
  6. 6 Беременность.
  7. 7 Употребление алкоголя.
  8. 8 Приём жирной пищи.
  9. 9 Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Рисунок 2 — Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL — это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

  1. 1 сравнительно высокая чувствительность;
  2. 2 сравнительно высокая специфичность;
  3. 3 легкость выполнения;
  4. 4 малая стоимость реактивов;
  5. 5 получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация — РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные — более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

  1. 1 От 0 до 20 — отрицательная проба.
  2. 2 От 21 до 50 — слабоположительная проба.
  3. 3 От 50 до 100 — положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Рисунок 3 — Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Рисунок 4 — Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Таблица 1 — Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

  1. 1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
  2. 2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
  3. 3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
  4. 4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
  5. 5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Источник: http://sterilno.net/infection/stds/laboratornaya-diagnostika-sifilisa.html

Ссылка на основную публикацию